Especie e tecido-especificidade das Thimet oligopeptidases (EC3.4.24.15 e EC3.4.22.19)

Especie e tecido-especificidade das Thimet oligopeptidases (EC3.4.24.15 e EC3.4.22.19)

Autor Hayashi, Mirian Akemi Furuie Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo A metalo-endooligopeptidase recombinante de testiculo de rato (EC 3.4.24.15 ou EOP 24.15) e a endo-oligopeptidase A de cerebro de coelho ou EOPA (outrora denominada de EC 3.4.22.19) foram comparadas, lado a lado, quanto as suas propriedades fisico-quimicas mais marcantes e quanto a sua especificidade por oligopeptideos. Em relacao a distribuicao tecidual em ratos e coelhos, nao foi possivel estabelecer nenhuma correlacao entre os niveis de atividade enzimatica no citosol e os niveis de RNA mensageiro codificante para a metalo-endooligopeptidase 24.15 (EOP 24.15). Os resultados sugerem que a atividade de metabolizacao de neuropeptideos predominante no citosol, atribuida a metalo-endooligopeptidase 24.15 (EOP 24.15), deva provavelmente ser determinada pela atividade de pelo menos duas enzimas citosolicas distintas, sendo uma predominante no testiculo de ratos (EOP 24.15) e a outra no cerebro e testiculo de coelho, e possivelmente, no cerebro de rato tambem (EOPA). Tanto a EOPA como a EOP 24.15 sao ativadas por DTT e inibidas irreversivelmente por compostos derivados da dinorfina marcados com grupamento SH-reativos, alem de nao serem inibidas por EDTA de forma proporcional a concentracao. Estas enzimas exibem a mesma especificidade frente a uma serie de peptideos bioativos, exceto quanto ao LH-RH e substancia P, que sao hidrolisados apenas pela EOP 24.15. Analisando todos os resultados observados, podemos concluir que e improvavel que a EOP 24.15 de testiculo de rato e a EOPA de cerebro de coelho sejam a mesma proteina, embora devam pertencer a uma mesma familia de oligopeptidases. Visando a determinacao da sequencia primaria da EOPA, o cDNA de uma biblioteca de cerebro de coelho, identificado atraves da selecao com anticorpo policlonal monoespecifico anti-EOPA, foi clonado e sequenciado. A sequencia primaria deduzida deste cDNA apresenta o omotifo tipico das metalo-proteases [HEXXH] , sem ter contudo, homologia significativa com proteases ou oligopeptidases conhecidas, incluindo a EOP 24.15. Por outro lado, foi observado um alto grau de homologia (~ 88% da sequencia num segmento de aproximadamente 400 pb) com a regiao rica em cisteinas, aparentemente envolvida na ligacao de citocinas, presente na proteina ohevino, e que parece exercer um papel importante na facilitacao da migracao dos linfocitos (Springer e cols., 1995). Ainda nao foi possivel expressar a proteina recombinante integra para que a atividade especifica caracteristica da endooligopeptidase A de cerebro de coelho fosse verificada, porem ensaios imunologicos realizados com anticorpos produzidos contra a proteina recombinante parcial e a distribuicao do RNA mensageiro correspondente nos diversos tecidos do coelho sugerem que o cDNA em questao codifica para a endooligopeptidase A, responsavel pela atividade de metabolismo de neuropeptideos no citosol de cerebro de coelho
Assunto Oligopeptídeos
Especificidade por Substrato
Especificidade da Espécie
Endopeptidases
Idioma Português
Data 1997
Publicado em São Paulo: [s.n.], 1997. 120 p.
Editor Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 120 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/15402

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