Purificação e caracterização de uma sulfatase do molusco Tagelus gibbus envolvida no metabolismo de glicosaminoglicanos

Purificação e caracterização de uma sulfatase do molusco Tagelus gibbus envolvida no metabolismo de glicosaminoglicanos

Título alternativo Sulfatase acting upon p-nitrophenylsulfate and sulfated glycosaminoglycans was isolated from the mollusc Tagelus gibbs
Autor Abreu, Luiz Roberto Diz de Autor UNIFESP Google Scholar
Orientador Dietrich, Carl Peter Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo Nosso trabalho consistiu no isolamento e caracterizacao de uma sulfatase, presente em tecidos do molusco Tagelus gibbus plebbeus Inicialmente, identificamos a presenca de exo- e endoglicosidases extratos enzimaticos precipitados por sulfato de amonio e acetona utilizando glicosaminoglicanos, fucanas de algas marinhas e substratos sinteticos p-nitrofenil derivados de acucares e de sulfato. A fracao F-90 da precipitacao por acetona, foi fracionada numa serie de quatro cromatografias, e ao final do processo, obtivemos uma purificacao da sulfatase em cerca de 6.000 vezes. Determinamos um peso molecular aproximado para a sulfatase entre 65.000 e 68.000 Daltons, este valor foi estimado relacionando-se s volume de eluicao em cromatografia em gel filtracao, com sua migracao e eletroforese em gel de poliacrilamida. Nos estudos cineticos realizados, encontramos valores otimos de p 5,0, temperatura de 60 ºC, e um valor de Km aparente de 2,25 mM com um Vmax de 72,7 mmoles de sulfato liberado/hora. Detectamos que os ions divalentes bario e magnesio, ativam atividade suffatasica, agindo como cofatores enzimaticos; e que sais d fosfato e sulfato, inibem a hidrolise do p-nitrofenjl sulfato, possuindo ambos um tipo de inibicao nao competitiva simples, com constantes de inibicao respectivamente de, O,7 e 2,3. Visto altas concentracoes de substrato inibirem a atividade enzimatica, e este fenomeno ser revertido por magnesio, concluimos que o verdadeiro substrato da enzima e o complexo substrato-cation. Na hidrolise do p-nitrofenil sulfato pela sulfatase, grupamentos de sulfidrila, histidina e arginina, provavelmente sao importantes. Encontramos que heparam sulfato e condroitim 4-sulfato, sao os compostos que mais interferem na catalise do p-nitrofenii sulfato e do heparam [35S]-sulfato
Assunto Sulfatases
Heparitina sulfato
Glicosaminoglicanas
Idioma Português
Data 1999
Publicado em São Paulo: [s.n.], 1999. 115 p. ilustab.
Editor Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 115 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/16508

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