Inducao de morte dos queratinocitos pela expressao do gene bsr1 (blasticidin S resistance 1)

Inducao de morte dos queratinocitos pela expressao do gene bsr1 (blasticidin S resistance 1)

Título alternativo Induction of keratinocyte death by brs 1 (blasticidin S resistence 1 gene) gene expression
Autor Bento, Fernanda Mara Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo O gene bsr (blasticidin S resistance) isolado de B. cereus K55-Sl, e frequentemente utilizado como um gene de selecao nas construcoes de vetores de expressao. O produto da expressao, blasticidina S desaminase, neutraliza a acao do antibiotico blasticidina S (BS) substituindo o grupamento amina por hidroxila. Este sistema de selecao bsr/BS foi testado em diversos tipos de celulas, desde microorganismos procariotos e eucariotos, e ate em celulas de mamiferos. Ate o momento, nenhuma reacao anormal causada por este gene ou seu produto foi relatada. Aqui, foi apresentado um trabalho inedito, onde os queratinocitos transduzidos pelo vetor retroviral LBr1SN, que carrega o gene bsr1 (bsr modificado para aumento de expressao), sao induzidos a morte apos 6 dias em cultura. As celulas da linhagem de queratinocitos de camundongo BALB/MK transduzidas com o LBr1SN e analisadas pelo FACS durante os tres ultimos dias antes da morte, mostrou que a maioria da populacao de celulas estava na fase Sub-Go do ciclo celular, no ultimo dia de analise. A coloracao do nucleo destas celulas com o Hoechst 33258 mostrou que, a maioria das celulas estavam com a cromatina condensada na forma de anel. Estes resultados sugerem que, as celulas BALB/MK transduzidas com o gene bsr1 morrem via apoptose. A morte dos queratinocitos BAL/MK e iniciada por um indutor molecular (IMC: indutor de morte celular), que e produzido pelas BALB/MK tranduzidas com o vetor LBr1 SN. A producao e a acao do IMC parece ser especifica dos queratinocitos, pois, as celulas de musculo liso vascular e os fibroblastos nao o produzem e nao sofrem sua acao, enquanto que, os queratinocitos primarios humanos transduzidos com o vetor LBr1 SN morrem no mesmo prazo de tempo visto com as BALB/MK/LBr1 SN. A inducao de morte dos queratinocitos transduzidos com o LBr1SN e reversivel ate o quarto dia apos a transducao. A reversao da morte celular e feita incubando os queratinocitos com o antibiotico BS em concentracoes superiores a 4 mg/ml. Entretanto, se a BS for retirada do meio, em menos de uma semana os queratinocitos aparecem mortos. O papel do gene bsr1 na inducao de morte dos queratinocitos via IMC e desconhecido, bem como, as propriedades fisico-quimicas e biologicas do IMC. Este trabalho nao so tem a importancia na abertura do estudo deste fenomeno de morte dos queratinocitos induzidos pelo gene bacteriano bsr1, mas tambem e uma alerta aos experimentos de transferencia e/ou terapia genica, onde...(au)
Assunto Queratinócitos
Morte Celular
Idioma Português
Data 2000
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2000. 96 p. ilus.
Editor Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 96 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Dissertação de mestrado
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/16906

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