Inibidor de calicreína plasmática humana isolado de Bauhinia bauhinioides: interação com peptídeos sintéticos e substratos fluorogênicos relacionados à sequência do sítio reativo

Abstract

Mendes descreveu em 1998, um inibidor de serinoprotease tipo Kunitz, isolado de sementes de Bauhinia (BbKI). A massa molecular, calculada a partir da sequencia primaria e 18034 (composicao elementar C813 H1273 N218 0240 S1 e pl 6,9). O inibidor mostrou alta homologia com outros inibidores tipo Kunitz de plantas, exceto pela ausencia de pontes disulfeto. BbKI apresenta um unico residuo cisteina na porcao C-terminal (residuo 154). A Arg foi definida como o aminoacido em P1, e, tem importante participacao na inibicao de tripsina por um mecanismo de slowtight binding com estequiometria de reacao de 1 :1. BbKI inibe tripsina (K; 0,6 qM), calicreina plasmatica (K; 0,35 rIM), plasmina (K; 33,1 rIM), e pouco efetivo na inibicao de quimotripsina (K; 3900 rIM), mostrou-se o melhor inibidor de calicreina plasmatica isolado de sementes de Bauhinia. Por esse motivo foi denominado: B. bauhinioides Kallikrein Inhibitor (BbKI). Para investigar a relacao entre estrutura primaria e seletividade inibitoria, foram realizados estudos comparativos entre parametros cineticos de hidrolise por calicreina plasmatica humana e outras serinoproteases, utilizando peptideos sinteticos e substratos peptidicos de fluorescencia apagada baseados no sitio reativo do inibidor. O peptideo sintetico (RPGLPVRFESPLRINIIKE) contendo 19 aminoacidos do sitio reativo do inibidor, inibiu a hidrolise por calicreina plasmatica do substrato_(au)