Comparação da especificidade da catepsina B para suas atividades endo e exopeptidásicas utilizando substratos peptídicos de fluorescência apagada internamente

Comparação da especificidade da catepsina B para suas atividades endo e exopeptidásicas utilizando substratos peptídicos de fluorescência apagada internamente

Título alternativo Comparison of endo and exopeptidase activities od cathepsin B throught the use of internally quenched fluorogenic peptide substrates
Autor Cezari, Maria Helena Sedenho Autor UNIFESP Google Scholar
Orientador Juliano, Luiz Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo Exploramos a especificidade da catepsina B recombinante humana expressa em levedura, Pichia pastoris. Sintetizamos e caracterizamos dois tipos de substratos de fluorescencia interna apagada, isto e, um formado por Abz-Dnp e outro por Trp-Dnp (Abz= acido oito-aminobenzoico, Trp=triptofano, Dnp= 2,4-dinitrophenila). como pares doador-aceptor de fluorescencia, todos com a carboxila C-terminal livre. Preparamos tres series de substratos, usando como referencia os seguintes peptideos: AbzFRDap(Dnp)[ ou K(Dnp)]P-OH, Abz-GFFRK(Dnp)W-OH e Dnp-GFRFW-OH. Fizemos o estudo da cinetica de hidrolise destes peptideos e determinamos as ligacoes clivadas para cada substrato. Isto nos garantiu que estavamos acompanhando a atividade carboxidipeptidasica. As observacoes mais relevantes, para a especificidade da atividade exopeptidasica da catepsina B, sao as seguintes: Phe na posicao P2 e o aminoacido preferencial Arg ou Phe na posicao P1 mostraram ser preferenciais na' dependencia do aminoacido colocado em P2'. Assim, com Pro nesta posicao o residuo Arg e preferencial, ja com Trp em P2' tanto Arg como Phe em P1 resultaram em bons substratos. K(Dnp) ou Dap(Dnp) no lado P' nao se diferenciam quanto a geracao de substratos eficientes para catepsina B. A natureza do aminoacido na posicao P2' tem um efeito muito determinante na susceptibilidade dos substratos. O Trp e o residuo preferencial nesta posicao, e a presenca de aminoacidos hidrofilicos ou carregados resulta em pessimos substratos. - Aminoacidos hidrofobicos sao preferidos na posicao Pi'.,_(au

Exploramos a especificidade da catepsina B recombinante humana expressa em levedura, Pichia pastoris. Sintetizamos e caracterizamos dois tipos de substratos de fluorescência interna apagada, isto é, um formado por Abz-Dnp e outro por Trp-Dnp (Abz= acido oito-aminobenzoico, Trp=triptofano, Dnp= 2,4-dinitrophenila). como pares doador-aceptor de fluorescência, todos com a carboxila C-terminal livre. Preparamos três séries de substratos, usando como referência os seguintes peptídeos: AbzFRDap(Dnp)[ ou K(Dnp)]P-OH, Abz-GFFRK(Dnp)W-OH e Dnp-GFRFW-OH. Fizemos o estudo da cinética de hidrólise destes peptídeos e determinamos as ligaçoes clivadas para cada substrato. Isto nos garantiu que estávamos acompanhando a atividade carboxidipeptidásica. As observaçoes mais relevantes, para a especificidade da atividade exopeptidásica da catepsina B, sao as seguintes: Phe na posiçao P2 é o aminoácido preferencial Arg ou Phe na posiçao P1 mostraram ser preferenciais na' dependência do aminoácido colocado em P2'. Assim, com Pro nesta posiçao o resíduo Arg é preferencial, já com Trp em P2' tanto Arg como Phe em P1 resultaram em bons substratos. K(Dnp) ou Dap(Dnp) no lado P' nao se diferenciam quanto à geraçao de substratos eficientes para catepsina B. A natureza do aminoácido na posiçao P2' tem um efeito muito determinante na susceptibilidade dos substratos. O Trp é o resíduo preferencial nesta posiçao, e a presença de aminoácidos hidrofílicos ou carregados resulta em péssimos substratos. - Aminoácidos hidrofóbicos sao preferidos na posiçao Pi'.,_(au
Assunto Catepsinas
Inibidores Enzimáticos
Idioma Português
Data 2001
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2001. 103 p. ilustab.
Editor Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 103 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/17633

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