Regulacao da transcricao do gene do receptor B2 de bradicinina de rato: identificacao de um elemento silenciador

Regulacao da transcricao do gene do receptor B2 de bradicinina de rato: identificacao de um elemento silenciador

Título alternativo Transcriptional regulation of the rat bradykinin B2 receptor gene: identification of a silencer element
Autor Baptista, Heloisa Allegro Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo As cininas estao envolvidas em varios processos fisiologicos e fisiopatologicos relacionados a homeostase cardiovascular, inflamacao, fluxo sanguineo e nocicepcao. Em condicoes fisiologicas, o receptor B2 da BK e expresso constitutivamente e medeia a maioria das acoes da BK incluindo reatividade vascular, respostas inflamatorias e proliferacao celular. Entretanto, os mecanismos que regulam a expressao deste gene ainda sao pouco conhecidos. Neste estudo, uma sequencia de aproximadamente 5 kb da extremidade 5' do gene foi isolada e sequenciada. Foram identificados diversos sitios de fatores de transcricao no promotor como o GATA, SRE-1, CRE, GRE e o repressor CDP. Nove construcoes mutantes do promotor foram clonadas em vetores de gene reporter luciferase e transfectadas em celulas NG10815 e celulas musculares lisas de rato (CML-A), revelando varios elementos regulatorios positivos (ERP) e negativos (ERN). Entretanto, as sequencias regulatorias funcionaram como ativadoras ou inibidoras da transcricao dependendo do tipo celular. Um elemento regulatorio negativo de 56 pb causou diminuicao na atividade do gene reporter em ambas as celulas e foi capaz de inibir o promotor heterologo de timidina quinase, independente de orientacao, sendo classificado como um silenciador classico. Ensaio de modificacao da mobilidade eletroforetica (EMSA) e ensaio de ressonancia de superficie (SPR) determinaram a ligacao de proteinas no silenciador. sendo especificas para cada tipo celular. O silenciador foi dividido em tres partes sendo observada a formacao de complexos mais intensos no fragmento F2 nas celulas NG108-15 enquanto que nas CML-A a ligacao de fatores de transcricao foi exclusiva neste fragmento. Celulas NG108-15 tratadas com dBcAMP e diferenciadas foram utilizadas como modelo de regulacao negativa do receptor BKB2. O RT-PCR para o receptor BKB2 com as celulas diferenciadas revelou uma menor quantidade de RNA mensageiro desse gene em comparacao com as celulas indiferenciadas. O EMSA revelou a presenca de complexos DNA-proteina mais intensos nas celulas NG108-15 diferenciadas, demonstrando que a regulacao negativa do receptor ocorreu a nivel transcricional causada pela maior ligacao de fatores de transcricao no silenciador. Desta forma podemos concluir que o receptor BKB2 apresenta um silenciador classico em sua sequencia e a regulacao de sua transcricao e celulaespecifica. Estudos posteriores serao necessarios determinar os fatores especificos e os mecanismos ...(au)
Assunto Cininas
Transcrição Genética
Genes
Idioma Português
Data 2002
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2002. 125 p. ilus.
Editor Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 125 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/17790

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