Clonagem e expressao de genes de fosfolipase C(plcB, plcC e plcD) de Mycobacterium tuberculosis em Escherichia coli e Mycobacterium smegmatis

Clonagem e expressao de genes de fosfolipase C(plcB, plcC e plcD) de Mycobacterium tuberculosis em Escherichia coli e Mycobacterium smegmatis

Título alternativo Cloning and expression of phospholipase C gene (plcB, plcC and plcD) from Mycobacterium tuberculosis in Escherichia coli and Mycobacterium smegmatis
Autor Silva, Ionara de Oliveira Garcia Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo Objetivo: Clonar tres genes de fosfolipase C de Mycobacterium tuberculosas (plcB, pIcC e picD) e expressar as proteinas recombinantes em E. coli e M. smegmatis. Verificar atividade hemolitica dos recombinantes. Metodo: Os fragmentos correspondentes foram clonados em vetores de expressao de E. coli da serie pET23a-b-c e usados para transformar E. coli BL21(ΔE3). Os mesmo fragmentos foram clonados em vetores da serie pMV261-2-3 e usados para transformar M. smegmatis. A expressao das proteinas recombinantes em E. coli foi analisada em gel de poliacrilamida e por imunoblot. Ensaios de hemolise foram realizados com os recombinantes construidos em BL21 (ΔE3) e M. smegmatis. Resultados: Os tres fragmentos foram clonados e as sequencias foram confirmadas por sequenciamento. As proteinas recombinantes foram visualizadas em gel de poliacrilamida e confirmadas em experimentos de imunoblot com soro anta-PLCA. Nao foi observada hemolise nos ensaios realizados com os recombinantes em BL21(DE3). Foi observada hemolise com os recombinantes construidos em M. smegmatis, incluindo os controles negativos. Conclusoes: Foram obtidos recombinantes expressando as proteinas PLCB, PLCC e PLCD em E. coli e M. smegmatis. Testes de hemolise para verificacao da atividade enzimatica das proteinas recombinantes devera ser padronizado
Assunto Mycobacterium tuberculosis
Fosfolipases Tipo C
Idioma Português
Data 2004
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2004. 77 p.
Editor Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 77 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Dissertação de mestrado
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/18832

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