Avaliacao de glicosamiglicanos e proteinas de matriz extracelular em queratinocitos submetidos ao estresse oxidativo e ao choque hiperosmotico

Avaliacao de glicosamiglicanos e proteinas de matriz extracelular em queratinocitos submetidos ao estresse oxidativo e ao choque hiperosmotico

Título alternativo Evaluation of glycosaminoglycans and extracelular matrix proteins in keratinocytes exposed to oxidative stress and hyperosmotic shock
Autor Leme Jr, Luiz Eugenio Garcez Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo A pele e o maior orgao do corpo, atuando como uma barreira contra a radiacao e patogenos, mantendo a temperatura corporal, prevenindo contra desidratacao e funcionando como orgao sensorial. Os glicosaminoglicanos (GAGs) tem importantes funcoes nas celulas da pele, tais como a participacao no controle da proliferacao e divisao celular, comunicacao e adesao celular e modulacao das respostas celulares aos estimulos externos. O estresse oxidativo e o choque hiperosmotico sao os tipos de estresses que mais afetam os queratinocitos da pele. Este trabalho avaliou os efeitos do estresse oxidativo, induzido pelo peroxido de hidrogenio (H2O2) e do choque hiperosmotico, induzido pelo sorbitol, sobre o perfil de GAGs e sobre a expressao genica e/ou proteica de sindecans e enzimas associadas ao metabolismo dessas moleculas em queratinocitos humanos da linhagem HaCaT. Proteoglicanos (PGs) foram metabolicamente marcados com [35S]-sulfato apos exposicao das celulas a 1,2 (IC25) e 2,0 mM (IC50) de H2O2 por 4 h (estresse oxidativo) e 0,4 (IC25) e 1,0 M (IC50) de sorbitol por 2 h (choque hiperosmotico). A seguir, os GAGs foram identificados pela diGestão com enzimas especificas. Os resultados demonstraram que celulas HaCaT sintetizam e secretam heparam sulfato (HS), acido hialuronico (AH) e um hibrido de condroitim sulfato e dermatam sulfato (CS/DS). O estresse oxidativo induzido por 2,0 mM de H2O2 (IC50) causou um aumento significativo na sintese de GAGs sulfatados ao mesmo tempo que provocou uma diminuicao na sintese e secrecao de AH. O tratamento com 1,2 mM de H2O2 (IC25) diminuiu a sintese e secrecao de AH, sem causar alteracoes no perfil de GAGs sulfatados. O choque hiperosmotico induzido pelo tratamento com sorbitol nas concentracoes de 0,4 M (IC25) e 1,0 M (IC50) provocou diminuicao na sintese e secrecao de GAGs sulfatados e aumento na concentracao de AH. Os niveis de expressao de genes relacionados ao metabolismo de proteoglicanos de HS (HPSE1, SDC1 e SDC4), genes relacionados ao metabolismo do AH (HAS2, HAS3, HYAL1 e HYAL2) e genes codificantes de gelatinases e seus inibidores (MMP2, MMP9, TIMP1, TIMP2 e RECK), analisados por qPCR, diminuiram significativamente tanto apos o estresse oxidativo como apos o choque hiperosmotico nas duas concentracoes estudadas. Uma diminuicao na expressao de HYAL3 foi observada em celulas expostas ao estresse oxidativo causado pela concentracao de H2O2 referente ao IC50. O gene HAS1 nao e expresso em celulas HaCaT. As concentracoes das proteinas HYAL1 e HYAL2, avaliadas por western blotting, aumentaram significativamente apos exposicao ao H2O2 e ao sorbitol nas concentracoes equivalentes aos valores de IC50. Esse aumento nas concentracoes de HYAL1 e HYAL2, juntamente com a degradacao quimica causada pelo H2O2, pode explicar a diminuicao observada nos niveis de AH apos o estresse oxidativo. A atividade da proteina HPSE1 nao variou nos tratamentos estudados, sugerindo que outros fatores contribuem para os niveis reduzidos de HS induzidos pelo choque hiperosmotico
Assunto Humanos
Queratinócitos
Estresse Oxidativo
Pressão Osmótica
Glicosaminoglicanas
Proteoglicanas
Metaloproteases
Humanos
Idioma Português
Data 2013
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2013. 83 p.
Editor Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 83 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22796

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